In PCR en tiempo real, Technologies

La extracción de ácidos nucleicos es una parte vital de la PCR en tiempo real y suele ser difícil debido a varios factores, entre ellos la alta variabilidad de las matrices de muestra y las sustancias inhibitorias, como ingredientes vegetales, alcoholes o sales.

La preparación de ácidos nucleicos puede constar de cuatro pasos principales:

  1. Lisis celular para romper células o tejidos
  2. Adsorción de ácidos nucleicos
  3. Lavado
  4. Elución

Los métodos de preparación manual de ácidos nucleicos suelen ser laboriosos y largos, y el resultado depende, entre otras cosas, de la naturaleza de la matriz de muestra, así como de la experiencia del personal de laboratorio, por ejemplo.

Las soluciones de extracción automatizada ayudan a simplificar y aumentan el rendimiento de la extracción de ácidos nucleicos. Una solución automatizada no solo disminuye el tiempo dedicado a actividades manuales y los costos de personal, sino que también aumenta la eficiencia y la calidad y ayuda a estandarizar y armonizar los métodos internos. Sin embargo, con el fin de competir con la extracción manual, los sistemas automatizados también deben cumplir con otros requisitos, como resultados reproducibles, contaminación cruzada mínima y, por supuesto, facilidad de uso.

Use solo un kit de preparación para una amplia gama de aplicaciones: El nuevo kit SureFast® Mag PREP Food (F1060) está previsto para usarse en la extracción de ADN animal y vegetal de muestras de alimentos y piensos, así como ADN bacteriano de cultivos enriquecidos junto con el equipo TANBead Maelstrom™ 8 Autostage (ZMAL8). La tecnología se basa en perlas magnéticas y hasta ocho muestras que se pueden procesar por cada análisis. Para la preparación de las muestras de virus, se recomienda el kit SureFast® Mag PREP Pathogens (F1062), que estará disponible pronto.

Estos son los únicos tres pasos que se deben realizar al emplear la solución directa de R-Biopharm para la preparación de ácidos nucleicos:

  1. Lisis: Añadir reactivos a la muestra homogeneizada e incubar con agitación continua en un baño seco
  2. Transferir el sobrenadante del lisado a una placa de pocillos profundos precargada
  3. Insertar la placa en el TANBead M8 Autostage y comenzar el proceso
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En un estudio exhaustivo realizado por Congen se analizó una variedad de matrices de alimentos y piensos mediante la comparación de los métodos de extracción con filtro de centrifugación y a base de perlas magnéticas. Los resultados mostraron varianzas de 1 a 2 cp entre las muestras extraídas de diferente manera. Asimismo, en algunas matrices se observaron mejores resultados de la PCR con el método de extracción a base de perlas magnéticas.

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